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水中糞大腸菌群的常見檢測方法

來源:西安海研生物科技公司         發(fā)布時(shí)間:2019-03-27

水中糞大腸菌群的常見檢測方法

水是人類賴以生存的基礎(chǔ),隨著人類社會生產(chǎn)的發(fā)展和技術(shù)的進(jìn)步,水質(zhì)污染現(xiàn)象日趨嚴(yán)重。病原微生物污染是我國水體污染的主要原因之一。污染水體的病原微生物種類繁多,而水中糞大腸菌群是水體糞便污染的指示菌,通過監(jiān)測該項(xiàng)目可以正確的判斷監(jiān)測水域內(nèi)污染程度,有效預(yù)報(bào)和控制流行疾病的發(fā)生與傳播。

常見的水中糞大腸菌群檢測方法如下:

1、多管發(fā)酵法

通過將污染水樣接種入多根試管中進(jìn)行恒溫培養(yǎng),利用大腸菌群繁殖時(shí)使乳糖發(fā)酵,并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃,同時(shí)產(chǎn)生氣泡的特有現(xiàn)象,根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所表現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目,從MPN表中查的相應(yīng)的MPN指數(shù),計(jì)算每升水中糞大腸菌群的最近似值。

2、濾膜法

將水樣注入已滅菌的放有孔徑為0.45μm濾膜的濾器中,經(jīng)過抽濾,將細(xì)菌截留在膜上,然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上,經(jīng)44.5℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng),計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色的菌落,計(jì)算出每升水的糞大腸菌數(shù)。

3、紙片法

采用紙片、紙膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體,將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面,通過糞大腸菌群在上面的生長、顯色來測定的方法,即糞大腸菌在紙片培養(yǎng)基上呈紅色菌落,菌落周圍產(chǎn)生黃圈是糞大腸菌分解乳糖產(chǎn)酸使指示劑變色的結(jié)果。

4、酶底物法

將加入酶底物檢測試劑的100ml水樣注入51孔或97孔的定量測量盤中進(jìn)行密封后培養(yǎng),由于大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生一種β-半乳糖苷酶分解PG使得培養(yǎng)液呈黃色,同時(shí)大腸埃希氏菌可以產(chǎn)生葡萄糖醛酸酶分解MUG,培養(yǎng)液將會在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光反應(yīng)。通過計(jì)算有黃色反應(yīng)和熒光反應(yīng)的孔穴數(shù),可對照MPN表查出其代表的糞大腸菌群最可能數(shù)水中糞大腸菌群。

5、聚合酶鏈?zhǔn)郊夹g(shù)

提取糞大腸菌群混懸液和待測水樣的DNA,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增編碼約260bp的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)和約150BP的UdiA基因(β-D-半乳糖苷酶基因)的DNA片段,分別檢測大腸菌群數(shù)和大腸桿菌。

6、熒光原位雜交技術(shù)

由于糞大腸菌群特異的DNA序列,借助熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為的探針與待測水樣中的DNA分子雜交,將雜交細(xì)胞經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進(jìn)行定性、定量分析,確定菌群數(shù)。

目前,大腸菌群檢測方法發(fā)展很快,已提高到分子生物學(xué)水平,使檢測更快速、酶底物法以其操作簡便、檢測周期短,將取代多管發(fā)酵法、濾膜法等傳統(tǒng)方法,尤其是酶底物法采用密封培養(yǎng)技術(shù),在檢測醫(yī)院污水時(shí)可以減少人員接觸而降低檢測人員的致病風(fēng)險(xiǎn),因此具有更強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值,正是目前水中糞大腸菌群的快速檢測標(biāo)準(zhǔn)方法之一。

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